Реакция Вассермана

В сыворотке крови больных сифилисом находятся реагины и антитела. Реагины обладают свойством вступать в соединения с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитела против бледной трепонемы вступают в соединение со специфическими антигенами. Образовавшиеся комплексы антиген - антитело сорбируют добавляемым в реакцию комплементом. Индикацию производят путем введения гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка). Для проведения реакции требуются:

а) изотонический раствор натрия хлорида;

б) ультраозвученный трепонемный (хранят в холодильнике при температуре +4 °С) и кардиолипиновый (хранят при комнатной температуре) антигены;

в) комплемент, представляющий собой сыворотку крови, полученную при пункции сердца 5-10 здоровых гвинейских свинок. Может сохраняться в холодильнике в течение 2 мес при условии консервирования 4 % раствором борной кислоты и 5 % раствором натрия сульфата;

г) гемолизин - гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированная эритроцитами барана с разными титрами (хранят в xолодильнике при температуре 4 °С);

д) эритроциты барана, получаемые пункцией яремной вены. Kровь собирают в стерильную банку со стеклянными шариками (для перемешивания), встряхивают 15 мин. Сгустки фибрина отделяют фильтрованием через стерильную марлю. Дефибринированную кровь можно хранить в холодильнике до 5 сут.

Иногда возникает необходимость более длительного хранения крови барана, в связи с чем ее консервируют специальным консервантом (6 г глюкозы, 4,5 г кислоты борной, 100 мл изотонического раствора натрия хлорида), который кипятят на водяной бане по 20 мин в день в течение 3 сут. На 100 мл дефибринированной крови барана требуется 15 мл консерванта. Консервированную таким образом дефибринированную кровь хранят в холодильнике.

Проведению основного опыта предшествует несколько этапов.

1. У больного из локтевой вены берут 5-10 мл крови и обрабатывают сыворотку. У детей кровь можно взять из височной вены или разреза на пятке. Пункцию делают стерильными или одразовыми инструментами, многоразовые шприц и иглу предварительно промывают изотоническим раствором натрия хлорида.

Кровь для исследования берут натощак; за 3-4 дня до исслевания больному запрещают употреблять наркотические средства, препараты наперстянки, принимать алкоголь.

Не следует проводить исследование у больных с повышенной температурой тела, после травмы, операции, наркоза, перенесенных недавно инфекционных заболеваний, у женщин во время менструации, у беременных (в последние 10 дней беременности), рожениц (в первые 10 дней после родов), а также новорожденных (в первые 10 дней жизни).

Полученную кровь в стерильной пробирке помещают на 15-30 мин в термостат при температуре 37 °С. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стерильной стеклянной палочкой и ставят в холодильник на сутки. Отделившуюся прозрачную сыворотку над сгустком отсасывают пастеровской пипеткой с помощью резиновой груши, осторожно сливают в другую стерильную пробирку и инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при температуре 56 °С. Приготовленную таким образом для опыта сыворотку можно хранить в холодильник 5-6 дней. 2. Антигены разводят соответственно способу и титру, указанному па этикетке.

3. Приготавливают гемолитическую систему. Для этого дефибринизированную кровь или эритроциты барана в количестве, необходимом для проведения реакции, центрифугируют, плазму осторожно отделяют, а осадок промывают 5-6 объемами изотонического раствора натрия хлорида до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет совершенно бесцветной. Из осадка готовят 3 % взвесь эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида по утроенному титру.

Раствор гемолитической сыворотки и взвесь эритроцитов барана быстро смешивают и помещают в термостат на 30 мин.

4. Сухой комплемент разводят изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:10, нормальную инактивированную сыворотку человека - 1:5.

Комплемент титруют в 30 пробирках, помещенных в штатив по 10 пробирок в 3 ряда. В двух рядах его титруют в присутствии двух антигенов, в третьем - с изотоническим раствором натрия хлорида. Пять пробирок являются контрольными: две для соответствующих двух антигенов и по одной - для контроля комплемента, гемолитической сыворотки и изотонического раствора натрия хлорида на гемотоксичность;

Пробирки помещают на 45 мин в термостат, после чего их проверяют. Гемолиза не должно быть ни в одной пробирке.

Комплемент в разведении 1:10 разливают в 10 пробирок 1-го ряда штатива в дозах: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0.36, 0,4, 0,44, 0,5 и 0,55 мл. К содержимому каждой пробирки добавляют изотонический раствор натрия хлорида до 1 мл и тщательно перемешивают. По 0,25 мл смеси из каждой пробирки переносят в соответствующие пробирки 2-го и 3-го рядов. Штатив с пробирками встряхивают, в 3-й ряд пробирок добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, вновь встряхивают и помещают на 45 мин в термостат при температуре 37 °С. Нормальную сыворотку крови человека, разведенную изотоническим раствором натрия хлоряда в пропорции 1:5, по 0,25 мл разливают во все 30 пробирок.

Антиген I (трепонемный ультраозвученный), разведенный по титру изотоническим раствором натрия хлорида, по 0,25 мл добавляют в 10 пробирок 1-го ряда; антиген II (кардиолипиновый в том же разведении и в том же количестве) - в 10 пробирок 2-го ряда. В 10 пробирок 3-го ряда приливают по 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида, оставшиеся 0,25 мл выливают. После инкубации в термостате 20 пробирок (1-го и 2-го ряда) добавляют по 0,5 мл гемолитнческой системы, встряхивают и повторно помещают в термостат на 45 мин.

Через 45 мин определяют рабочую дозу комплемента с надбавкой в пределах 15-20 %. Титром комплемента считают его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз эритроцитов барана в присутствии антигена и нормальной сыворотки крови человека.

Основной опыт заключается в том, что каждую испытуемую инактивированную сыворотку, разведенную в пропорции 1:5 изотоническим раствором натрия хлорида, разливают по 0,25 мл в три пробирки. В первую пробирку добавляют 0,25 мл антигена I, во вторую-0,25 мл тигена II, в третью (контроль)-0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют также по 0,25 мл разведенного до рабочей дозы комплемента. Все пробирки помещают на 45 мин в термостат, затем в них добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и ставят в термостат на 45-50 мин. Результат опыта гистрируют после наступления полного гемолиза в контрольных пробирках.

Результаты реакции оценивают плюсами:

* полная задержка гемолиза (резкоположительная реакция) ++++,

* значительная (положительная реакция) +++,

* частичная (слабоположительная реакция) ++

* незначительная (сомнительная реакция) + или ±,

* отсутствие задержки гемолиза (отрицательная реакция).

При количественном методе проведения реакцию Вассермана ставят с уменьшающимися объемами сыворотки, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида.

Клиническое значение реакции Вассермана трудно переоценить. Ее проводят всем больным до начала лечения, но особое значение она имеет при скрытом сифилисе, поражении внутренних органов и нервной системы.

Результаты реакции Вассермана характеризуют качество проведенного лечения, что дает основание в определенные сроки снимать с учета лечившихся больных.

При первичном сифилисе реакция Вассермана положительная обычно в конце 6-й недели с момента заражения; при вторичном свежем сифилисе она положительная почти в 100 % случаев, при вторичном рецидивном в 98-100%; третичном активном в 85%; третичном скрытом в 60 % случаев.

Реакцию Вассермана проводят двукратно всем беременным, больным с соматическими, нервными, психическими и кожными болезнями, а также декретируемым контингентам населения. В то же время к положительным и слабоположительным результатам реакции следует относиться критически, так как они могут быть в конце беременности и после родов, при гипертиреозе, малярии, проказе, распаде злокачественной опухоли, инфекционных заболеваниях, коллагенозах и др. Поэтому при наличии клинических проявлений болезни их следует учитывать, наряду с данными бактериоскопии, в первую очередь. Вместе с тем имеются факторы, которые могут исказить истинный характер полученных результатов реакции Вассермана: плохо вымытая лабораторная посуда (следы кислоты и щелочи в пробирках), длительное хранение крови, взятой для исследования, употребление больными жиров и алкоголя перед обследованием, период менструации и др.

Во всех случаях желательно проводить комплексное обследование больного, включающее, помимо реакции Вассермана, также РИБТ (см. 122, 123, 124) и др.

При поскабливании папул у больных каплевидным парапсориазом на их поверхности появляются чешуйки. После их снятия обнажается блестящая поверхность папулы. Феномен применяется для отличия каплевидного парапсориаза от красного плоского лишая и папулезного сифилиса. Поскабливание лучше производить ...
Кольцо, окружающее элемент при этом дерматозе, составлено из мелких папул (по данным некоторых авторов, пузырей). При пальпации окружности элемента ощущается плотный шнур, заложенный в коже. Феномен имеет значение для отличия кольцевидной центробежной эритемы от кольцевидной гранулемы и ...
При легком постукивании кончиками согнутых пальцев по костям больных лепрой пациенты ощущают весьма интенсивную болезненность, часто независимо от стадии, формы и давности болезни. Особенно выражена болезненность при поколачивании лобных, скуловых и больше-берцовых костей. Феномен имеет большую ...
Уретроскопию проводят с диагностической и лечебной целью, также для установления критерия излеченности. Предварительно подготавливают уретроскоп и больного к исследованию. Уретроскоп Валентина в рабочем (собранном) состоянии через трансформатор включают в сеть, проверяя осветительную систему, ...
В реакции участвуют предполагаемые аллергены, базофильные гранулоциты кролика и сыворотка крови больного. Подозреваемые в сенсибилизирующих свойствах лекарственные и некоторые другие химические вещества растирают в изотоническом растворе натрия хлорида или изотоническом фосфатном буфере в ...
Производится термометрами различных конструкций, но наиболее точные данные получают с помощью контактной термопары. При использовании отдельных электротермометров либо блока для термометрии, вмонтированного в КДУ, следует придерживаться определенных правил: производить исследования в одинаковых ...
Установление патогенеза дерматоза является одной из трудных сторон диагноза, а иногда и самым важным,, обобщающим его завершением. Иногда патогенез дерматоза остается совершенно не вскрытым, несмотря на то у что данный случай был хорошо изучен клинически, гистологически, бактериологически. ...
Несмотря на то, что во многих случаях можно не только поставить точный клинический диагноз кожного заболевания, но и высказаться об его этиологии, мы все же для выяснения этиологии часто прибегаем к лабораторному исследованию. При пиодермиях, например, этиология во многих случаях ...
Несмотря на то, что экзема является одним из частых кожных заболеваний и больной нередко приходит к врачу уже с готовым диагнозом, все же ни при каком другом дерматозе не наблюдаются столь часто ошибки диагностики. Можно без преувеличения сказать, что чем менее квалифицирован врач, тем чаще он ...
Следы от укусов, вызываемых вшами, настолько характерны по их локализации и осложнениям, что, казалось бы, эти случаи не должны служить поводом для диагностических ошибок. К сожалению, и при этих, легко распознаваемых изменениях кожи встречаются ошибки. Как показал наш опыт, они имеют место ...
При гистологическом исследовании очагов микоза стоп никаких специфических изменений не отмечается, за исключением наличия в них нитей мицелия гриба. Дифференциальный диагноз. Лабораторное (микроскопическое и культуральное) доказательство наличия гриба в очаге поражения играет решающую роль в ...
Чесотка — заразное паразитарное заболевание кожи, возбудителем которого является чесоточный клещ. Заражение происходит путем непосредственного контакта с больным, а также через нательное и постельное белье, одежду, предметы обихода, бывшие в употреблении у больного, при пользовании общей ...